살리실산 측정
LUX 카세트에 결합된 SA 분해 연산자의 유도에 의해 생성된 발광은 바이오센서 기반 방법을 사용하여 잎의 SA를 측정하는데 사용되었다.
총 SA와 자유 SA는 설명된 대로 GC-MS에 의해 정량화되었다.
두 방법 모두 100~200mg의 잎샘플이 액체 질소에 동결되었고 조직 검사기(Retsch)에 의해 파괴되었다.
재료는 250µl NaOAc 0.1M pH5.5에서 중단되고 혼합되었다.
샘플은 마이크로퓨지에서 15분 동안 원심분리하여 200μl의 상등액을 96웰 PCR 플레이트로 옮기고 1.5시간 동안 37°C에서 4U의 아몬드 베타글루코시다아제(시그마)로 처리하였다.
바이오센서 측정의 경우 30μl 샘플을 96웰 블랙 옵티플레이트(PerkinMer)로 옮겼다.
SA(Sigma)의 표준 곡선은 잎 표본을 모방하기 위해 Col-0NahG 잎의 20µl µ-glucosidase-treated leaf 추출물로 보완된 10µl 부피에 사용되었다.
표준 곡선은 0 ~ 20 μg의 총 SA/g 잎 신선 중량을 측정하기 위해 설계 및 시험되었다.
1시간 동안 37°C에서 배양하기 전에 각 광원 샘플에 대해 설명과 50 μl 세균성 서스펜션(OD600.4)을 추가했다.
광학판은 각 표본이 1/3초 동안 방출하는 발광을 측정하는 발광계(베르톨드 기술)에 의해 판독되었다.
총 SA 농도를 계산하기 위해 세 개의 플레이트 판독에서 얻은 평균 발광이 사용되었습다.
표준 곡선의 발광 증가는 비선형적이었기 때문에, 우리는 R(Cran 3.2.2)의 근사 fun() 함수를 사용하여 데이터 점을 보관했다.

식물 대사물(SA 및 SAG)에 대한 가스 크로마토그래피-질량분광분석(GC-MS) 기반 분석(S4A Fig)은 하트만 외 2018[86]에서 자세히 설명한 대로 수정하여 수행되었다.
분쇄 냉동 잎 표본 50mg을 H2O(80:20, v/v)에서 MeOH/50 mM NaPO4 pH 6 1ml로 2회 추출했다.
내부 표준화를 위해 D9-Pip, D9-NHP, D5-SA, 인돌-3-프로피온산(IPA), 살리신, 리비톨 1μg이 첨가되었다.
600 μl의 추출물이 증발하여 건조해졌다.
분석물질의 자유 하이드록실 그룹은 피리딘 20μl, 트리메틸클로로실레인(v/v) 1% 함유 N-메틸-N-트리메틸실리리플루오로아세타마이드(MSTA) 20μl, 헥산 60μl을 첨가하여 트리메틸실릴 유도체로 변환되었다.
용액은 70°C로 30분간 가열한 후 헥산(hexane)으로 희석한 후 2μl의 용액을 현상액 ZB-35(30m x 0.25mm x 0.25μm) 모세관 기둥이 장착된 가스 크로마토그래프(GC 7890A; 애질런트테크놀로지스)에서 분리했다.
2분 동안 70°C, 10°C/min ~ 320°C, 5분 동안 320°C의 GC 온도 설정이 사용되었다.
질량 스펙트럼은 5975C 질량 분광 검출기(Agilent Technologies)로 m/z 50과 m/z 750 사이의 전자 이온화 모드에서 기록되었다. 대사물은 애질런트 MSD ChemStation 소프트웨어를 사용하여 분석되었다.
정량화를 위해 선택된 이온 크로마토그램의 물질 피크다.